猫 部分显露肌梭包埋为例

固定

将取出的肌肉置于含 5% 戊er醛的 0.1mol/l 二甲SHEN酸Na缓冲液内，PH 值为 7.2, 原位固定 5 min(戊er醛常由 25% 溶液 稀释而成。因其易聚合，所以使用之前应保存于 4℃ 以下)。

将肌纤维切成 10 mm 长，以确保至少含有一个肌梭，用上述相同固定液再固定 4~14d(总固定时间因实验室而异，固定时间 的差异一般不会明显影响固定效果)。

缓冲液清洗 30 min。

置于缓冲液配制的 1% 四氧化e固定 4 h(四氧化e渗透速度很慢，但薄短筒状肌的厚度小于 1 mm，4 h 足以充分固定。一般 将四氧化e配成 2% 的储存液，装瓶并密封后储存于冰箱内。配制固定液时，向储存液内加入等量的 0.2mol/L 二甲SHEN酸 钠缓冲液，便稀释成了所需的终浓度)。

脱水和包埋

室温下将标本用 70%、95% 和 100%(两次）的梯度乙醇脱水，每次 10 min。

用 1:1 的乙醇与环Y丙烷（1,2-环Y丙烷）混合液处理 15 min[环Y丙烷常用作中间溶媒，在石蜡包埋法中发挥类似「透明 剂」的作用。大多数透明剂的折射指数与脱水蛋白及其他细胞内成分相似。该名称的由来是因为最初它们被用来固定透明的 组织，虽然现在知道它们几乎没有这样的功能，但这个名称一直沿用至今。其他脱水方法见 Glauert(1975)]。

环氧丙烧处理 15 min。

用 1:1 的环氧丙烧与 Epon 的混合物（除了加速剂以外的成分）浸透，置入敞口的容器内，通风橱内过夜（挥发的环Y丙烷 能帮助硬化剂更好地向组织块渗透)。

倒掉瓶内剩余的渗透媒质，移入新鲜的纯 Epori 中。

将切片平整地包埋于内衬铝箔的模具内，先 45℃聚合 12 h, 再 60℃聚合 24 h

切片和染色

借助常规玻璃刀用超薄切片机手动切片，片厚 1/um，每 10 张切片收集为 1 组 (如需要，可用带氯仿蒸气的刷子靠近切片或 通过电热丝的辐射热使切片平铺于水面上。玻璃刀应该经常更换，更换时应注意玻璃刀的准确复位，使用机械开关控制刀的 运动以确保连续切割时能得到相同的切片。由于刀与组织块表面间的距离仅有几个微米，为了在更换新刀后仍能准确定位， 可将刀背照亮，此时刀刃与组织块表面的缝隙看起来呈一条亮线)。

用钻石刀将盖玻片（标准尺寸为 50 mmX20 mm) 切割成 3 mm 宽的窄条，将窄条的一端浸入液面下直接从水槽内收集切片 （图 1-1A)(这些切片有的排列成串，有的单独存在。用一根粘有睫毛的牙签可以很容易地将切片导入窄条的表面，窄条需用 钟表镊夹持,. 将窄条的一面靠近切片呈舌尖样伸出的一端，再使切片干燥，这个方法既简便又能使切片很好地粘附在窄条玻 片上)。

用软的织物将窄条的背面擦干，任切片漂浮在窄条前端的水滴中。

用一块温度约为 70”C 的热板使切片干燥并贴附于窄条表面 [最好将一块玻璃载玻片永久性地固定于热板上，而将窄条置于 载玻片上烘干（图 I-IB)]。

用甲苯胺蓝（toluidineblue)(图 1-2A) 和派罗宁（pyronine)(图 1-2B) 在尚 pH 值条件下染色，将一滴染液滴于切片表面，加 热直到染液滴从边缘处开始干燥为止。水洗后用 95% 乙醇分色 [染料配制：将 0.1 g 甲苯胺蓝、0.05 g 派罗宁和 0.1 g 硼砂 (四硼酸钠）溶于 60 ml 蒸馏水即可，配好的染液应定期过滤]。

在热板上干燥后用 DPX[distrene(聚苯乙烯)-plasticizer(塑化剂)-xylene(二甲苯)] 封片 [一张载玻片上放置 5 个窄条，每个窄 条有 10 张切片，用 50 mmX22 mm 的盖玻片封片（图 1—1C)。当然，封片时应注意将贴有切片的一面朝上]。

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