耐热反转录酶

描述：ThermoStable V Reverse Transcriptase 反 转录酶是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而 得。该酶去除了 RNase H 活性中，从而避免反转录过程中 降解 RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强， 可耐受 65℃高温反应。相比于低温条件下反转录反应，采用 高温反转录可显著打开 RNA 二级结构，从而提高复杂 RNA 模板的扩增性能、提高反转录 cDNA 的长度和产量，从而提 高后续检测的灵敏度。 组分 名称 10KU 50KU ThermoStable V RTase (200 U/μl) 50 μl 250 μl 5×RT Buffer 1ml 1mlx10 单位定义：以 poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在 37°C 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性 沉淀物所需要的酶量，定义为一个活性单位。 储存：-20°C 可保存 3 年。 操作方法 1. 按以下组分配制反应体系 ThermoStable V RTase 0.5-1 μl 5×RT Buffer 4 μl dNTP Mixture (10 mM each) 1 μl Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg 20×Oligo dT(25)&Random Primer * 1 μl RNase Inhibitor (40 U/μl) 0.5 μl RNase Free H2O Up to 20 μl *注：Oligo dT(25) 使用浓度为 20~50 μM, 如使用 Random9 随机引物可使用 125 μM，基因特异性引物可使用 5 μM。 2．在 PCR 仪上按下列条件进行反转录反应 30°C 5 min *37~65°C 15~60 min 85°C 10 min 4°C *通常反转录温度设置为 50°C，无论是高 GC 或长片段模板， 均可获得综合性的 cDNA 产量。在采用 65°C 反应条件时可 显著提高>75%GC 含量的 cDNA 产物。 3. 反转录所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反应或储存于 -20°C。

耐热反转录酶(ThermoStable V Reverse Transcriptase)是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。该酶去除了RNase H活性中，从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐受65℃高温反应。相比于低温条件下反转录反应，采用高温反转录可显著打开RNA二级结构，从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量，从而提高后续检测的灵敏度。

组分

组分名称 数量 ThermoStable V RTase (200 U/μl) 50 μl/250 μl 5×RT Buffer 1 ml/1 ml×10

单位定义

以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在37°C条件下，10分钟内催化1 nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为一个活性单位。

储存

-20°C可保存2年。

反应实例

以人RNA为模板，应用耐热反转录酶和M-MuLV反转录酶分别在50°C、55°C、60°C和65°C进行反转录反应，反应时间为15min，然后进行PCR扩增获得542bp的片段。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！